|
|
|
|
| LEADER |
14286cam a2200541 i 4500 |
| 001 |
NSK01000167735 |
| 003 |
HR-ZaNSK |
| 005 |
20070917113241.0 |
| 008 |
960617s1995 ci a m 000 0 hrv |
| 035 |
|
|
|9 (HR-ZaNSK)167935
|
| 035 |
|
|
|9 (HR-ZaNSK)960617073
|
| 035 |
|
|
|a (HR-ZaNSK)000167735
|
| 040 |
|
|
|a HR-ZaNSK
|b hrv
|c HR-ZaNSK
|e ppiak
|
| 041 |
0 |
|
|a hrv
|
| 044 |
|
|
|a ci
|c hr
|
| 080 |
|
|
|a 577.175.6:577.152
|
| 100 |
1 |
|
|a Zechner-Krpan, Vesna
|
| 245 |
1 |
0 |
|a Utjecaj aktivina-A i inhibina na gonadotropni mehanizam povratne veze i njihov utjecaj na aktivnost 5[alfa]-reduktaze u stanicama hipofize sisavaca :
|b doktorska disertacija /
|c Vesna Zechner - Krpan.
|
| 260 |
|
|
|a Zagreb :
|b V. Zechner-Krpan,
|c 1995
|e ([s. l. :
|f s. n.])
|
| 300 |
|
|
|a 113 listova :
|b ilustr. djelomično u bojama, table ;
|c 30 cm.
|
| 500 |
|
|
|a Doktor biotehničkih znanosti - biotehnologija.
|
| 500 |
|
|
|a mentor: Zlatko Kniewald; Komisija za ocjenu: Jasna Kniewald, Zlatko Kniewald, Stanko Čajavec; Komisija za obranu: Jasna Kniewald, Zlatko Kniewald, Stanko Čajavec; datum obrane: 03.04.1995.; datum promocije: 14.02.1997.
|
| 502 |
|
|
|a Sveučilište u Zagrebu, Prehrambeno-biotehnološki fakultet, Zagreb, 1995
|
| 504 |
|
|
|a Bibliografija: str. 100-106
|
| 504 |
|
|
|a Sažetak
|
| 520 |
|
|
|a Sažetak: Upotreba kulture stanica hipofize sisavaca omogućila je praćenje regulacije izlučivanja hormona hipofize pod utjecajem različitih stimulatora ili inhibitora. Takva kultura omogućuje kompletnu izolaciju hipofize od živčanih i hormonskih utjecaja i dodatak test-supstanci u kontroliranu okolinu. Korištenjem ovog eksperimentalnog modela mogu se pratiti promjene u izlučivanju hormona hipofize u medij, kao i njihov sadržaj zaostao u samim stanicama. Glavni metabolički put razgradnje testosterona u neuroendokrinom tkivu odraslog štakora mužjaka praćen je katalitičkim djelovanjem 5[alfa]-reduktaze, 3[alfa] i 17[beta]-hidroksisteroid dehidrogenaze. Tkivo hipofize kontrolnih i kastriranih štakora nakon 3-satne inkubacije izvršilo je pregradnju dodanog testosterona u 5[alfa]-reducirane metabolite.
|
| 520 |
|
|
|a Kastracija je pojačala aktivnost 5[alfa]-reduktaze za 92%, a posljedično tome došlo je do smanjivanja aktivnosti 17[beta]-hidroksisteroid dehidrogenaze za 41%, jer je testosteron bio u potpunosti pregrađen u 5[alfa]-DHT. Uspostavljena kultura stanica hipofize kontrolnih i kastriranih štakora izvršila je pregradnju (4-14C)-testosterona u njegove 5[alfa]-reducirane metabolite skoro jednakim intenzitetom kao i tkivo hipofize, a kastracija je pojačala aktivnost 5[alfa]-reduktaze. In vitro dodatak GnRH tkivu hipofize kastriranih štakora djelovao je inhibicijski na nastajanje 5[alfa]-DHT-a (64%) i 3[alfa]-diola (41%).
|
| 520 |
|
|
|a Njegovo inhibicijsko djelovanje potvrđeno je i kod pregradnje progesterona u 3[alfa],20[alfa]-dihidroksi-5[alfa]-pregnan u tkivu hipofize gonadektomiranih mužjaka (32%) i ženki (53%) štakora, te kod pregradnje progesterona u 5[alfa]-pregnan-3,20-dion (44%) u ovarijaktomiranih životinja u odnosu na ovarijaktomirane životinje bez dodatka GnRH i u nastajanju 3[alfa]-hidroksi-5[alfa]-pregnan-20-on u kontrolnih ženki (59%) u odnosu na kontrolne ženke bez dodatka GnRH u in vitro pokusima. Praćenje utjecaja produljenog vremena kultivacije na broj živih i odumrlih stanica hipofize svinja mužjaka i ženki u uspostavljenoj primarnoj kulturi,pokazalo je stagniranje broja preživjelih stanica nakon 144-satne kultivacije. Nakon 48-satne kultivacije postignuto je 85%-tno prihvaćanje stanica u odnosu na broj nacjepljenih stanica.
|
| 520 |
|
|
|a Broj mrtvih stanica se nakon 144-satne kultivacije povećavao, iako je broj živih stanica ostao isti. To znači da su stanice i dalje rasle, ali je došlo do njihovog povećanog odumiranja uslijed iscrpljivanja hranjivih sastojaka iz medija koji nije promjenjen u ovih 144 sata. Količina testosterona u stanicama hipofize svinja mužjaka i ženki nakon 3-dnevne kultivacije ukazuje da su stanice hipofize pokusnih životinja izvršile preuzimanje dodanog testosterona iz medija i pregradile ga pomoću enzimskog sistema u 5[alfa]-reducirane metabolite, odnosno uključile ga u postupak kojim se vrši regulacija sinteze LH i FSH u stanicama.
|
| 520 |
|
|
|a Praćenje ugradnje (3H)-timidina u DNA stanica koje su prethodno 48 sati kultivirane u inkubatoru pokazalo je da hipofize svinja mužjaka nakon in vitro dodatka GnRH i LH u odnosu na kontrolu ugrađuju više (3H)-timidina, što se odražava i na povećanom broju živih stanica za 25%. Opisani postupak izolacije stanica omogućio je visoki stupanj nacjepljivanja i 80%-tnu uspješnost prihvaćanja stanica već nakon 24 sata kultivacije. Tako prihvaćene stanice prednjeg režnja hipofize otkrile su značajne subpopulacije različitih tipova stanica koje su u ovoj disertaciji detektirane elektronskom mikroskopijom. Također su ovisno o duljini kultivacije uočene i međusobne veze između stanica preko staničnih dodataka, te i značajne morfološke promjene samih stanica. Najpovoljnija gustoća i broj nacjepljenih stanica u kulturi kreće se od 1 - 5 x 10 5 stanica/mL.
|
| 520 |
|
|
|a Stanice hipofize ovaca bile su kultivirane in vitro kako bi se otkrilo međusobno djelovanje aktivina-A i različitih spojeva za koje se zna da ili stimuliraju ili inhibiraju izlučivanje FSH,LH,GH,PRL i TSH. Stimulatori hormonskog izlučivanja GnRH, GnRH i TRH dodani su u kulturu stanica hipofize ovaca svaki u količini od 10 nM, a kao inhibitori hormonskog izlučivanja dodani su: inhibin (1 [mikro]L) i SRIF (10 nM). Stanice hipofize ovaca bile su predtretirane sa aktivinom-A (10 nM), a izlučivanje pojedinih navedenih hormona praćeno je u mediju, kao i u sadržaju zaostalom u samim stanicama. Izlučivanje FSH u medij pod utjecajem inhibina smanjeno je i kod stanica sa i bez tretmana sa aktivinom-A. Inhibin je smanjio jedino stanični sadržaj FSH kod stanica koje nisu predtretirane sa aktivinom-A.
|
| 520 |
|
|
|a GnRH smanjuje koncentraciju FSH u mediju kod stanica koje nisu predtretirane sa aktivinom-A,a TRH reducira koncentraciju FSH u mediju kod stanica predtretiranih sa aktivinom-A.Izlučivanje LH u medij pod utjecajem GnRH povećano je i kod stanica sa i bez tretmana sa aktivinom-A.GnRH smanjuje sadržaj LH u stanicama koje nisu predtretirane sa aktivinom-A.SRIF i inhibin smanjuju stanični sadržaj LH kod stanica bez tretmana sa aktivinom-A.Izlučivanje GH u medij pod utjecajem GHRH je povećano i kod stanica sa i bez tretmana sa aktivinom-A,dok SRIF izaziva suprotan efekt.GHRH i SRIF smanjuju stanični sadržaj GH kod stanica koje nisu predtretirane sa aktivinom-A.Izlučivanje PRL u medij pod utjecajem TRH povećano je i kod stanica sa i bez tretmana sa aktivinom-A,dok je obrnuti efekt TRH uočen na PRL sadržaj stanica koje nisu predtretirane sa aktivinom-A.
|
| 520 |
|
|
|a Izlučivanje TSH u medij pod utjecajem TRH povećano je i kod stanica sa i bez tretmana sa aktivinom-A. Sumirajući dobivene rezultate možemo zaključiti da je povećana aktivnost 5[alfa]-reduktaze u kastriranih životinja neposredno u korelaciji s djelovanjem aktivina-A koji stimulira otpuštanje FSH iz stanica. Uklanjanjem testisa prilikom kastracije uklanja se glavni izvor za sintezu androgenih hormona, ali i inhibina te ostaje otvoreno pitanje da li povećana aktivnost 5[alfa]-reduktaze u hipofizi nije možda posljedica poremećenog odnosa aktivina-A i inhibina u korist aktivina-A, a ne samo nedostatka endogenog testosterona.
|
| 520 |
|
|
|a Summary: The use of pituitary cells in culture for studying the regulation of pituitary hormone secretion provides a number of advantages over in vivo experiments. Such cultures allow the isolation of the pituitary from the neural and hormonal influences and the addition of the test substances under a controlled environment. By using this experimental model and pituitary cells in culture, the cell environment could be studied and the secretion and cell content of hormones could be determined. The main metabolic pathway of testosterone in adult male rat neuroendocrine tissue is followed by the catalytic influence of 5[alfa]-reductase, 3[alfa]- and 17[beta]-hydroxysteroid dehydrogenase activities. These enzymes are responsible for the formation of 5[alfa]-DHT, 3[alfa]-diole androstanedione and androstenedione.
|
| 520 |
|
|
|a After 3 hours incubation the testosterone is mainly metabolized to 5[alfa]-reduced derivatives by pituitaries from intact and castrated rats. The castration significantly increased the 5[alfa]-reductase activity by 92%, but decreased the 17[beta]-HSD activity by 41%. It was logical, because the testosterone was mainly converted to 5[alfa]-DHT. The primary culture of pituitary cells from intact and castrated male rats converted testosteron to its 5[alfa]-reduced derivatives with the same results as the pituitary tissue itself. In vitro addition of GnRH to the pituitary tissue of the castrated rats inhibited the conversion of testosterone to 5[alfa]-DHT (64%) and 3[alfa]-diol (41%).
|
| 520 |
|
|
|a The inhibitory effect of GnRH was confirmed also with progesterone reducing metabolism to its derivatives at the pituitary tissue: 3[alfa],20[alfa]-dihydroxy-5[alfa]-pregnane in castrated by 32%, in intact male by 47% and in ovarioectomized rats by 53%; to 5[alfa]-pregnane-3,20-dione by 44% in ovarioectomized and to 3[alfa]-hydroxy-5[alfa]-pregnane-20-one by 59% in intact female rats. Maintenance in monolayer cultures involves attachment of the cells to a surface of the plate. After 48 hours incubation period it was determined that 85% of the initial cells suspension remained firmly attached to the botoom of the plate. The prolonged cultivation for 144 hours did not change the ratio of live and dead pituitary female and male porcine cells in culture, as well as their total number.
|
| 520 |
|
|
|a The pituitary cells from female and male pigs were showing the high rate of (4-14C)-testosterone incorporation after 3 days cultivation. The cells managed to overtake the added testosterone from the medium and to converted it to its 5[alfa]-metabolites. They included the testosterone into the mechanism which regulates synthesis of LH and FSH in the cells. In vitro GnRH and pLH treatment of anterior pituitary cell cultures from male pigs for 48 hours significantly stimulated (3H)-thymidine incorporation into DNA of cells and also increased the number of attached cells (25%) labeled with (3H)-thymidine, as assessed by scintillation counting. The described dispersion and disruption procedure of the tissue produced high density plating efficiency and 80% efficiency in cell-to-cell attachment after 24 hr of cultivation.
|
| 520 |
|
|
|a Such attached anterior pituitary cells discovered the subpopulation of different cell types which were detected by electron microscopy of the culture. After prolonged cultivation most of the cells have established small colonies and contacts among cells appeared abundant. The significant cell-to-cell formation of aggregates was evident, as well as the mofphological changes within the colony. The optimal density of the cells in culture is approx. 1-5 x 10 5 cells/mL. From my results it can be concluded that cell-to-cell contact is required for optimal cell function in culture, but that overcrowding has inhibitory effect, because of the accumulation of metabolic wastes, depletion of nutrients and change in the pH of the medium.
|
| 520 |
|
|
|a Ovine pituitary cells were cultured in vitro to determine the interaction of activin-A and inhibin with various compounds known to either stimulate or suppress secretion of follicle stimulation hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), growth hormone (GH), prolactin (PRL) and thyroid stimulating hormone (TSH). Stimulators of hormone secretion were gonadotropin-releasing hormone (GnRH), growth hormone-releasing hormone (GHRH) or thyrotropin releasing hormone (TRH), each at 10 nM. Suppressors of hormone secretion were inhibin (1[mikro]L) and somatotropin release inhibiting factor (SRIF) 10 nM. Pituitary cells were pretreated with activin-A (10 nM) and the secretion of netioned pituitary hormones was measured in medium and in the content of these hormones remaining in the cells.
|
| 520 |
|
|
|a Activin-A increased the secretion of FSH into medium by ovine pituitary cells in culture. For FSH, inhibin reduced secretion into medium by both activin-A and non-activin-A pretreated cells, but inhibin only reduced FSH cell content of non-activin-A pretreated cells. Unexpectedly, GnRH reduced medium concentration of FSH by non-activin-A treated cells, and TRH reduced medium concentration of FSH by activin-A pretreated cell. For LH, GnRH increased secretion into medium by both activin-A pretreated and non-pretreated cells, but reduced the content of LH in non-activin-A pretreated cells. Both SRIF and inhibin reduced the cell content of non-activin-A pretreated cells. For GH, GHRH increased while SRIF reduced secretion into medium, either with or without activin-A pretreatment.
|
| 520 |
|
|
|a Both GHRH and SRIF reduced thr cell content of GH, but the reduction was only observed for cells that were not pretreated with activin-A. For PRL, TRH increased secretion into medium, both with and without activin-A pretreatment. For cell content of non-activin-A pretreated cells, just the opposite pattern was observed. TRH decreased cell content. For TSH, TRH increased concentration in medium of both activin-A and non-activin-A pretreated cells. Is the higher 5[alfa]-reductase activity in the pituitary the result of disturbed amounts of activin-A and inhibin or is it the result of insuficiency of endogene testosterone is still unknown.
|
| 520 |
|
|
|a I can conclude that the higher 5[alfa]-reductase activity in castrated rats is in correlation with the action of activin-A, which stimulates the synthesis and release of FSH from the cells, while the castration is eliminating the main source for synthesis of androgen hormones (testes), as well as the source inhibin.
|
| 650 |
|
7 |
|a Hormoni
|x Utjecaj enzima
|2 nskps
|
| 981 |
|
|
|p CRO
|r HRB1995
|
| 998 |
|
|
|n DCD
|c dkro9802
|c rjki9803
|c rjkp9803
|
| 852 |
4 |
|
|j DCD-ZG-68/96
|
| 876 |
|
|
|e DCD
|a 68/1996
|
| 886 |
0 |
|
|2 unimarc
|b 13939iam0 2200469 450
|